Клинический случай по цитохимии из 🇺🇿 Узбекистана
❗ Пациент 62 года. Жалобы при поступлении на частые головные боли, головокружение, повышенное артериальное давление, зуд кожи, появление покраснений на коже, слабость и утомляемость.
✅ Предварительный диагноз: истинная полицитемия.
🩸 Гемоглобин 189 г/л. Эритроциты 6.8 млн./мл Лейкоциты 5.6 тыс./мкл. Тромбоцитоз. СОЭ 3 мм/час.
🎨 Цитохимия в эритроцитах: обработка нитритом натрия, проведенная для превращения гемоглобина в метгемоглобин, показала увеличение количества эритроцитов с метгемоглобином (снимки ниже).
❓Какие дополнительные исследования необходимы для подтверждения диагноза?
🙏 Клинический случай любезно предоставила Зебинисо Холмурадова врач-морфолог, Узбекистан, Кашкадарьинский многопрофильный детский медицинский центр.
📖 Справочные данные: Методика исследования эритроцитов с нитратом натрия для выявления метгемоглобина Определение способности эритроцитов накапливать метгемоглобин путём цитохимического превращения гемоглобина в метгемоглобин с использованием нитрита натрия.
Оборудование и реактивы: Раствор нитрита натрия (NaNO₂) — 1% раствор. Сухие стеклянные предметные стёкла. Фиксатор — может использоваться смесь спирта и ацетона в соотношении 1:1. Краситель — по выбору, обычно используется гематоксилин-эозин или другой окрашивающий агент для дифференцировки клеток. Микроскоп — световой микроскоп с возможностью увеличения до 1000x. Процедура: Забор крови:
Использовать свежую капиллярную или венозную кровь пациента, обработанную антикоагулянтом (например, ЭДТА). Приготовление мазка:
Нанести каплю крови на чистое стекло и сделать мазок стандартным методом. Дать мазку высохнуть на воздухе.
Фиксация: Закрепить мазок, погрузив его на 5–10 минут в фиксатор (смесь спирта и ацетона 1:1). Дать мазку высохнуть на воздухе. Обработка нитритом натрия:
Погрузить мазок в 1% раствор нитрита натрия на 10–15 минут. Нитрат натрия окисляет гемоглобин в метгемоглобин, придавая эритроцитам специфическое окрашивание, которое можно визуализировать микроскопически.
Окрашивание: После обработки нитритом натрия промыть мазок дистиллированной водой, чтобы удалить избыток реагента. Окрасить мазок стандартным красителем (например, гематоксилин-эозином) для улучшения контраста и идентификации клеток.
Микроскопия: Подсушить мазок и исследовать его под световым микроскопом при увеличении 400–1000x. Искать эритроциты, содержащие метгемоглобин. Такие клетки могут отличаться по цвету (более тёмные участки) из-за присутствия метгемоглобина, который образуется после обработки нитратом натрия.
Интерпретация результатов: Положительный результат: Наблюдается увеличение количества эритроцитов, содержащих метгемоглобин. Это указывает на потенциальную склонность эритроцитов к окислению гемоглобина в метгемоглобин, что может быть связано с особенностями клеточной мембраны или ферментативными нарушениями. Отрицательный результат: Эритроциты остаются неокрашенными метгемоглобином или присутствует только незначительное его количество. Это считается нормой и указывает на отсутствие повышенной склонности к накоплению метгемоглобина.
Примечание: Этот метод не является показателем уровня метгемоглобина в крови пациента. Он используется для выявления устойчивости эритроцитов к окислительным повреждениям и способности клеток к накоплению метгемоглобина при искусственном воздействии.
Важно: Так как метод не является стандартным, его результаты следует интерпретировать с осторожностью и учитывать в комплексе с клиническими и лабораторными данными.
