Автор статьи: Иван Галак, г. Чита, Читинская государственная медицинская академия.
В ходе реального эксперимента мы увидели, как с течением времени изменяется морфология крови и какие ошибки могут подстерегать при микроскопии долго стоявшей в пробирке крови.
Материалы и методы #
Для эксперимента брали кровь из локтевой вены относительно здорового некурящего мужчины 21 года в 4 пробирки с K3-ЭДТА. Четыре пробирки взяли для того, чтобы исключить попадание инородных частиц бактериального или грибкового происхождения из внешней среды: для каждого времени своя пробирка, до приготовления мазка их не открывали.
Вакутейнеры аккуратно перевернули 8–10 раз для равномерного смешивания крови с антикоагулянтом, поместили в штатив на 30 минут для отстаивания. Сгустков и признаков гемолиза не было.
Через 30 минут приготовили первый мазок и окрасили по Паппенгейму, затем кровь хранили при температуре +4 °C в холодильнике и делали мазки через 12, 24 и 48 часов, также окрашивая по Паппенгейму. Окрашенные мазки микроскопировали при увеличении 1000× с использованием масляной иммерсии.
30 минут после взятия крови #
При микроскопии мазка, сделанного через 30 минут, патологических изменений в морфологии форменных элементов выявлено не было, патологических изменений в лейкоцитарной формуле также не выявлено.
12 часов после взятия крови #
Микроскопия мазка, сделанного спустя 12 часов, показала наличие вакуолизации цитоплазмы нейтрофильных гранулоцитов.
24 часа после взятия крови #
Спустя 24 часа отмечаются уже более существенные изменения, появляются тени из разрушенных нейтрофилов, лимфоцитов и других лейкоцитов.
Вакуоли видны в виде неокрашенных участков цитоплазмы нейтрофила, в результате чего клетки имеют «прострелянный» или «решётчатый» вид. Такая картина является следствием жировой дегенерации, что может быть на фоне тяжёлого воспалительного или даже септического состояния пациента. Липидная природа вакуолей может быть подтверждена их суданофилией при окраске суданом чёрным Б.
Вакуолизация может быть обусловлена и формированием фаголизосом в ходе фагоцитоза: если объект фагоцитоза уже лизирован, то будет видна пустая вакуоль. Изменений морфологии других лейкоцитов и эритроцитов не выявлено.
При оценке морфологии эритроцитов можно увидеть незначительный анизо- и пойкилоцитоз. Пойкилоцитоз преимущественно представлен эхиноцитозом. Эхиноциты являются неспецифической разновидностью пойкилоцитоза: они могут появляться и на фоне патологии, например при тяжёлых инфекциях, но могут быть и артефактом при длительном стоянии образца крови.
Не перепутайте с тенями Боткина — Гумпрехта
Тени из разрушенных лейкоцитов могут быть ошибочно приняты за тени Боткина — Гумпрехта при хроническом лимфолейкозе. При ХЛЛ они появляются из-за того, что лимфоциты изначально «хрупкие» и разрушаются при приготовлении мазка. Здесь же вследствие длительного нахождения вне организма происходит дегенерация цитоскелета клеток — такие тени не признак патологии, а артефакт.
48 часов после взятия крови #
После 48 часов кровь крайне изменена, выраженный эхиноцитоз.
Спустя 48 часов наблюдается деформация лейкоцитов, разрушенные клетки — тени, — а также признаки апоптоза лейкоцитов. У сегментоядерных нейтрофилов с признаками апоптоза отсутствуют перетяжки между сегментами ядра и имеется резкий пикноз хроматина.
Особо интересен феномен наличия «псевдонормобластов» — апоптотических нейтрофилов, имитирующих морфологию нормобластов (NRBC).
На последнем снимке можно увидеть клетки, очень похожие на нормобласты. Но это не они: это нейтрофилы в состоянии апоптоза, их хроматин слился в единую массу, он резко пикнотичен и может располагаться эксцентрично. Такая морфология способна ввести в заблуждение и привести к ошибочной идентификации нормобластов.
Отличить апоптозные нейтрофилы можно по цитоплазме: если это нейтрофил, то в его цитоплазме имеется зернистость, а у нормобластов цитоплазма абсолютно однородная, без каких-либо включений. Однако даже анализатор может принять их за нормобласты, поэтому следует быть внимательным.
Заключение #
Если от момента забора до исследования проходит длительное время, следует ожидать искажения результатов. Если по каким-либо причинам кровь в лабораторию доставили спустя более 24 часов, а анализ нужно делать, то работать с ней нужно особо внимательно: очень сложно в таком случае достоверно определить, появились ли изменения из-за патологии или это следствие длительной транспортировки.
Среди множества факторов, влияющих на точность анализа, немаловажным является время, но на практике, к сожалению, не всегда удаётся провести исследование за максимально короткий срок. При невозможности точно дифференцировать клетки крови вследствие длительной транспортировки пробы рекомендуется пригласить пациента на повторное взятие биоматериала.
Благодарности #
Благодарю за любезную помощь в составлении плана эксперимента и в редактировании статьи создателя проекта «Лейкоформула», врача клинической лабораторной диагностики Зайцева Евгения Геннадьевича.
