🔴 Оценка жизнеспособности сперматозоидов: методология и интерпретация результатов
🔬 Жизнеспособность сперматозоидов, определяемая по целостности клеточной мембраны, может быть оценена в рамках стандартного анализа всех образцов эякулята. Однако, если в образце обнаруживается не менее 40% подвижных сперматозоидов, проведение теста на жизнеспособность не является обязательным. В случаях, когда образец содержит сперматозоиды с низкой подвижностью, данный тест становится критически важным для дифференциации неподвижных живых клеток от неподвижных мертвых. Наличие значительного количества живых, но неподвижных сперматозоидов может указывать на структурные аномалии жгутика, тогда как высокий процент мертвых клеток может свидетельствовать о патологиях придатка яичка или иммунологических реакциях, вызванных инфекционными процессами.
🎨 Метод окрашивания эозин-нигрозином для оценки жизнеспособности сперматозоидов
Одним из эффективных методов оценки жизнеспособности сперматозоидов является использование эозин-нигрозинового окрашивания. Этот одноэтапный метод позволяет повысить контрастность между фоном и головками сперматозоидов, что облегчает их визуализацию и анализ. Преимущество метода заключается также в возможности длительного хранения окрашенных препаратов на предметных стеклах для последующего повторного анализа, обучения персонала или контроля качества.
Процедура проведения теста:
Тщательно перемешайте образец эякулята для обеспечения однородности.
Отберите аликвоту объемом 50 мкл и смешайте ее с равным объемом раствора эозин-нигрозина.
Нанесите полученную смесь на предметное стекло и равномерно распределите для создания мазка. Дайте препарату высохнуть на воздухе.
После высыхания исследуйте мазок под световым микроскопом при увеличении ×1000 с использованием масляной иммерсии.
Подсчитайте количество окрашенных (мертвых) и неокрашенных (живых) сперматозоидов с помощью лабораторного счетчика.
Для минимизации ошибки выборки рекомендуется оценить не менее 200 сперматозоидов.
💡Интерпретация результатов: Жизнеспособность сперматозоидов определяется по состоянию их клеточной мембраны. Мертвые клетки имеют поврежденную мембрану, что позволяет красителю проникать внутрь, тогда как неповрежденная мембрана живых клеток препятствует проникновению красителя. При микроскопическом исследовании живые сперматозоиды имеют белые головки, а мертвые — окрашены в красный или розовый цвет. Сперматозоиды с бледно-розовыми головками классифицируются как мертвые. Если окрашивание наблюдается только в области шейки, а головка остается неокрашенной, это свидетельствует о частичном повреждении мембраны («протекающая шейная мембрана»), но не о полной гибели клетки. Такие сперматозоиды следует учитывать как живые.
❗ Заключение: Тест на жизнеспособность с использованием эозин-нигрозина является простым, но информативным методом, позволяющим оценить функциональное состояние сперматозоидов. Его применение особенно важно в случаях сниженной подвижности сперматозоидов, что помогает выявить потенциальные патологии и определить дальнейшую диагностическую или терапевтическую тактику.
🙏 Снимки и описание любезно предоставила врач КЛД Полина Дыбка г. Краснодар.
